医院药学/中草药化学成分一般鉴别方法
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（1）加热或矿酸试验：取检品的水溶液1ml于试管中，加热至沸或加5％盐酸，如发生混浊或有沉淀示含有水溶性蛋白质。
（2）缩二脲试验：取检品的水溶液1ml，加10％氧化钠溶液2滴，充分摇匀，逐渐加入硫酸铜试液，随加摇匀，注意观察，如呈现紫色或紫红色示可能含有蛋白质和氨基酸。
凡蛋白质结构中含有两个或两个以上肽键（－CONH－）者均有此反应，能在碱性溶液中与Cu2+生成仙络合物，呈现一系列的颜色反应，二肽呈蓝色，三肽呈紫色，加肽以上呈红色，肽键越多颜色越红。
（3）茚三酮试验，取检品的水溶液1ml，加入茚三酮试液2-3滴，加热煮沸4-5分钟，待其冷却，呈现红色棕色或蓝紫色（蛋白质、胨类、肽类及氨基酸）。
α氨基酸与茚三酮的水合作物作用，氨其酸氧化成醛、氨和二氧化碳，而茚三酮被还原成仲醇，与所后成的氨及另一分子茚三酮缩合生成有蓝紫色的化合物。
【注】①茚三酮试剂主要是多肽和氨基酸的显色剂，反应在1小时内稳定。试剂溶液pH值以5-7为宜，必要时可加吡啶数滴或醋酸钠调整。
②此反应非常灵敏，但有个别氨基酸不能呈紫色，而呈黄色，如脯氨酸。
（4）氨基酸薄层层析检出反应：
②展开剂：（1）正丁醇：水（1：1）（2）正丁醇：醋酸：水（4：1：5）
③显色剂：0.5％茚三酮丙酮溶液，喷雾后于1100烘箱放置5分钟，显蓝紫允或紫色。
2．皂甙
（1）泡沫试验：取检品的水溶液2ml于带塞试管中，用力振摇3分钟，即产生持久性蜂窝状泡沫（维持10分钟以上），且泡沫量不少于液体体积的1／3。
【注】常用的增溶剂吐温、司盘，振摇时均能产生持久性泡沫，要注意区别。
（2）溶血试验：取试管4支，分别加入滤液0.25、0.5、0.75 ml，然后依次分别加入生理盐水2.25、2.0、1.75、1.5 ml，使每一个试管中的溶液都成为2.5ml, 再将各试管加入2％的血细胞悬液2.5ml，振摇均匀后，同置于370水浴或25－270的室温中注意观察溶血情况，一般观察3小时即可，或先滴红细胞于显微镜下，然后滴加检液看血细胞是否消失。如有溶血现象示正反应。
【注】①鞣质对血红细胞有凝集作用，干扰溶血试验的观察，应事先除去（可用取胜酰胺粉吸附或用明胶沉淀）。
②检液应为中性溶液。
（3）醋酐浓硫酸试验（Liebrmann Burchard反应）取检品的水溶液置蒸发皿中，于水浴上蒸干，残渣加入少量冰醋酸使溶解，再加入醋酐浓硫酸（19：1）试液，呈现红紫色并变成污色绿色（甾类、三萜类成分或皂甙）
（4）区别甾体皂甙和三萜皂甙：取带塞试管两支，各盛检品的水溶解1 ml，1支加0.1N盐酸溶液2ml，另一支加0.1N氢氧化钠溶液2ml用力振摇1分钟（需左右手交替振摇各半分钟），观察两管泡沫的多少，若两管泡沫体积相同或酸管多，示含三萜式皂甙；若加碱管泡沫多于加酸管示含甾示含甾体皂甙。
三萜皂甙为酸性皂甙在酸性水溶液中形成较稳定的泡沫；甾体皂甙为中性皂甙在碱笥溶液中能形成较稳定的泡沫。
3．糖、多糖或甙类
（1）碱性酒石酸铜试液：取检品的水溶液1－2ml（如为醇溶液须将醇蒸发除去），加入碱笥酒石酸铜试液1ml，于沸水浴上加热5分钟，产生棕红色或砖红色氧化亚铜沉淀，示有还原糖。
还原糖能使二价铜盐（蓝色）还原成氧化亚铜，醛糖的醛基氧化成羧基：
【注】①如检液呈酸性，应先碱化。
②此反应所产生的沉淀由于条件不同，其颜色也不同，质点上的呈黄色，质点大的呈红色。有保持性胶体存在时，也常产生黄色沉淀。
③职样品中含有其他醛、酮及还原较强的其他成分，或中划药制剂中附加的抗氧剂、；葡萄糖等均可显阳性反应。
（2）α萘酚试验（Molisch紫环反应）：取检品的水溶液1ml，加5％萘酚试液数滴振摇后，沿管壁滴入5-6滴浓硫酸，使成两液层，待2-3分钟后，两层液面出现紫红色环（糖、多糖或甙类）。
多糖类遇浓硫酸被水解成单糖，单糖被浓硫酸脱水闭环，形成糠醛类化合物，在浓硫酸存在下与α萘酚发生酚醛缩合反应，生成紫红色缩合物。
【注】①甙的分子结构中含有糖基，一般属于单糖类，如葡萄糖，鼠李糖、半乳糖，但也有含二分子糖（双糖）或多分子糖（多糖）。在上述反应条件下，甙被水解成单糖，因此甙萘酚试验，系分子中糖部分的反应。
②由于此反应较为灵敏，如有微量滤纸纤维或中草药粉末存在于溶液中，都能产生上述反应。故滤过时应加注意。
（3）多糖的确证试验：取检品的水溶液5ml于水 蒸发至干，加入1ml蒸馏水，再加入乙醇5ml，如出现沉淀，滤过收集后用少量热乙醇洗涤，再将沉淀物溶于3ml蒸馏水中，做下例试验。
①碘试验：取检品的不溶液1ml，加碘试液1滴，观察颜色变化，如呈蓝黑色为地衣糖；紫黑色为糊精；蓝色加热消失，冷后蓝色再现为淀粉。
②多糖水解：取检品的水溶液1ml，加入稀盐酸5滴，置沸水浴中加热10-15分钟，然后用10％氢氧化钠液中和至中性，再加新配制的碱性酒石酸铜试淮4滴，另取检液1ml，不加酸水解直接加入上述试液4滴，两管同置水浴上煮沸5-6分钟。如果水解后生成棕红色常常物的量比未经水解的多，则示有多糖。
多糖水解后产生单糖，利用单糖的还原性，使铜离子还原成氧化亚铜。
4．鞣质及酚类
（1）三氯化铁试验：取检品的水溶液1ml，加三氯化铁试液1－2滴，呈现绿色、污绿色、蓝黑色或暗紫色（可水解鞣质显蓝一蓝黑色，缩合鞣 显绿色一污绿色）。
鞣质均是多羟基酚的衍生物，即多元酚，能和三价铁离子发生颜色反应生成复杂的络盐。
【注】此反应如遇有矿酸或有机酸、醋酸盐等存在，能阻碍颜色的生成。硝基酚类对三氯化铁试剂无明显反应。
（2）明胶试验：取检品的水溶液1ml，加氯化钠明溶液2-3滴，即生成白色沉淀物。
鞣质有凝固蛋白的性能。
（3）溴试验：取检品的水溶液1ml，加溴试液1－2滴，生成白色或沉淀物，示可能含有酚或儿茶酚鞣质。
【注】过多的溴会阻碍鞣质的沉淀，因此溴水不宜多加。
（4）香草醛一酸试验：取检品的水溶液点于滤纸片上，干后，喷雾或滴加香草醛一盐酸试液，呈现红色斑点（多元酚类物质）。
（5）鞣质、酚类薄层层析检出反应：
①吸附剂：聚酰胺；硅胶；硅胶；石膏：水（5：1：7）调成状，涂成薄板，1050烘干45分钟。
②展开剂：乙醇：醋酸（100：2）；正丁醇：乙酸乙酯：水（5：4：1）；苯：甲醇（95：5）。
③显色剂：10％三氯化铁溶液；1％三氯化铁乙醇溶液与1％铁氰化钾水溶液（1：1）显蓝一紫色斑点。
5．黄酮及其甙类
（1）盐酸一镁（或锌）粉试验：取检品的乙醇溶液1ml，加放少量镁粉（或锌粉），然后加浓盐酸4-5滴，置沸水浴中加热2-3分钟，如出现红色示有游离黄酮类或黄酮甙（以同法不加镁或粉做一对照，如两管都显红色则有花色素存在。如继续加碳酸试液使成碱笥即变成紫色双转变为蓝色，即证明含花色素）。
黄酮类的乙醇溶液，在盐酸存在的情况下，能被镁粉还原，生成花色甙元而呈现红色或紫色反应（个别为淡黄色、橙色、紫色或蓝色）。这是由于酮类化合物分子中含有一个碱性氧原子，致能溶于稀酸中被还原成带四价的氧原子即锌盐。本法是鉴别黄酮类的一个反应。但花色素本身在酸性下（不需加镁粉）呈红色，应加以区别。
【注】①此反庆仅在化学结构中，第三位上带羟基的酮醇类显色较明显，而其它黄酮烷酮类均不甚明显。因此试验呈阴性反庆是不能做出否定的结论，尚需结合其他实验再做结论。
②试验应在醇中进行，水分多会影响颜色的生成。此反庆较慢，有时需置水浴上加热，以促使反应的进行。
（2）荧光试验：
①三氯化铝试验：取检品的乙醇溶液点于滤纸片上（干后再点1次，使其浓度庥中），干后，喷雾1％三氯化铝乙醇试液，在紫外光灯下观察，呈现黄色、绿色、橙色等荧光为黄酮类；呈现天蓝色或黄绿色；荧光，则为二氢黄酮类。这是区别二氢黄酮类化合物的一种鉴别反应。
②硼酸丙酮枸橼酸丙酮试验：取检品的乙醇溶液1ml，在沸水浴上蒸干加入饱和硼酸丙酮溶液及10％枸橼酸丙酮溶液各0.5ml，蒸去丙酮后，在紫外光灯下观察，管内呈现强烈的绿色荧光（黄酮或其甙类）。
（3）碱液试验：取检品的乙醇溶液点于滤纸片上（干后，再点一次，使其溶液集中），干后，喷1％碳酸钠溶液或在氨蒸气中熏几分钟，呈现亮黄、绿或橙黄色。如将氨气熏过的滤纸露置空气中，颜色逐渐裉去而变为原有的颜色（黄酮或其甙类）。
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试剂 |
一 |
NH3 |
AICI3 |
Na2CO3 |
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光线 |
ViS. |
U.V |
ViS. |
U.V |
ViS. |
U.V |
ViS. |
U.V |
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化 合 物 |
黄酮 |
淡黄 |
暗棕、红棕、黄棕 |
黄 |
亮黄 |
淡黄 |
亮黄 |
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黄酮醇 |
淡黄 |
亮黄、黄绿、棕 |
黄 |
亮黄、黄绿、绿 |
黄 |
黄、黄棕、暗蓝 |
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异黄酮 |
无色 |
淡黄、紫 |
无色 |
淡黄、紫 |
无色 |
淡绿 |
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儿茶精 |
无色 |
无色 |
无色 |
淡蓝黑 |
无色 |
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二氢黄酮 |
无色 |
无色** |
无色 |
无色、淡黄、淡绿 |
无色 |
淡黄、绿 |
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花色甙 |
红、橙紫 |
深红、橙紫、淡棕 |
蓝 |
暗蓝 |
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查耳酮 |
黄 |
棕、黑、黄棕 |
黄、橙、红 |
橙、红、紫黑 |
黄、橙 |
橙*、棕、红 |
橙、蓝红 |
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*示有荧光＊＊示在短波紫外线光下为黑色ViS. 系可风光U.V系紫外光
6．蒽醌及其甙类 取检品的乙醇溶液10ml，蒸去乙醇，残渣加5％氢氧化钠溶液2-3ml，在沸水中加15分钟，冷后滤过，滤液加稀盐酸酸化，加乙醚提取，取乙醚提取液做下列检查：
（1）碱液试验：取上述乙醚溶液，加等量1％氢氧化钠溶液，摇匀，水层呈现红色，加入少许3％过氧化氢溶液，在沸水浴中加热4分钟，红色不裉，当加酸酸化后，红色消失。加碱碱化后红色又出现（蒽醌类化合物反应）。
1，8一二羟基蒽醌的酚羟基遇氢氧化钠生成钠盐，而呈现红色，遇酸显黄色。
【注】蒽醌和二蒽酮与碱液不显红色，只呈黄色，但以氧化羟基蒽醌后遇碱即显红色。
（2）醋酸镁试验：取上述醚溶液1ml，蒸去乙醚，残渣加入乙醇1ml溶解，加入1％醋酸镁甲醇溶液3滴，显红色（如显橙黄色可能为二氢蒽醌）。
羟基蒽醌类与醋酸镁甲醇溶液反应可显橙、红、蓝、紫等色，产生这些颜色的必要投机倒把至少有一个α位羟基。加羟基的位置不同，产生的颜色也不同。一般在同一苯环上有两个α羟基者显紫红色或蓝色；如同一苯环在有两个邻位的羟基，一个α位，一个β位，显紫色或紫锴。其他α羟基蒽醌一般呈橙至红色。因此这一颜色反应仅可作蒽醌的检只识用，而且还可初步判断羟的基的位置。
【注】醋酸镁试验亦可用滤纸斑点显色法进行。
（3）蒽醌薄微量检出反应：
①吸附剂：硅胶；中性氧化铝（Ⅲ级）；硅胶G湿法制板。
②展开剂：苯：醋酸（6：3）石油醚：丙酮：水（5：3：3：5）；苯甲酸酯：甲酸（74：24：1）。
③显色剂；5％氢氧化钠液（显红色）；1％醋酸镁甲醇溶液（显黄色）。
此外亦可在紫外灯光下观察荧光。
7．强心甙
（1）3，5一二硝基苯甲酸试验（Kedde’s反应）：取检品的乙醇溶液2 ml，加3，5一一硝基苯甲酸试液3-4滴再加10％氢氧化钠溶液2滴，呈现红色或紫红色（9为α、β不饱和内酯环强心甙的反应）。
（2）碱性苦味酸试验：取检品的醇溶液1ml，显橙色或橙红色（此反应常在15分钟后，显色最明显）。
（3）亚硝酰铁氰化钠试验（Legal反应）：取检品的醇溶液1ml，蒸去溶剂，放冷后，加吡啶 少许使残渣溶解，加0.5%亚铁试液4-6滴，摇匀，再加入10％氢氧化钠1－2滴，即显红色并逐渐消失（为检查强心甙元的反应）。
（4）三氯化铁水醋酸试验（Keller反应）：取检品的乙醇溶液2ml，蒸去溶剂，残渣加0.5%三氯化铁冰醋酸溶液1ml，使溶解后，沿试管壁加入浓硫酸1ml，在两液界面显红棕色环，继则变为浅绿、蓝色，而冰醋酸层显蓝色，示含α去氧糖强心甙。
（5）醋酐一浓硫本试验（Liebirman Barchard 反应）：取检品的乙醇溶液2 ml，置蒸发皿中，于水浴上蒸干，残渣加冰醋酸1ml使溶解，再加入醋酐一浓硫酸（19：1）数滴，呈现黄→红→蓝→紫→污绿色，并逐渐裉色。因颜色变化很快，须注意观察（为检查强心甙分子结构中甾体母核的反应）。
【注】①试验1，2，3，的反应，均系在较强的碱性条件下进行，当有蒽醌存在时，须先将检液置水浴上蒸去乙醇，再加乙醚适量，用1％氢氧化钠溶液反复萃除蒽醌（弃去红色碱液），然后将乙醚溶液于水浴上蒸去乙醚 ，残渣再用乙醇溶解后，供试验用，以免干扰。
②试验4的反应仅对游离的去氧糖和结合的甙呈正反应。但当α去氧糖与葡萄糖等其他糖结合的多，如不水解则为负反应。
③上述鉴别反应均呈阳性,可判断为强心甙。
8．内酯、香豆精及其甙类：取检品的乙醇溶液10m1，加5％盐酸溶液10，在沸水浴 中热15－20分钟，冷后，加苯提取将苯提取液于水浴上蒸干（避火），残渣加适量乙醇溶解后，供做下列检查：
（1）异羟肟酸铁试验：取上检液2ml，加盐酸羟试液2滴，10％氢氧化钾的甲醇溶液2滴，在水浴上微热，冷却，用稀盐酸酸化，加入15三氯化铁试剂液1－2滴，显紫色苛橙红色。
内酯及香豆素类在碱性条件下，与羟反应生成异羟肟酸，与铁盐络合而显色。
（2）内酯试验：取上检液2ml，加1％氢氯化钠溶液2m1，在沸水浴中加热3-5分钟，如溶液较前澄明，加酸酸化后又变混浊为正反应。
内酯化合物在热碱溶液中，开环成盐而溶于水，酸化则重新闭环，而出内酯化合物，溶液即变混浊。
（3）重氮化反应：取上检液1ml，加等体积3％碳酸钠溶液，在沸水浴中加热3-4分钟，冷后，加入新配制的重氮化试剂1－2滴，即显红色。
（4）荧光反应：取上检液点于滤纸上（干后，再点1次，以集中浓度），在紫外光灯下观察，如为羟基香豆精应呈现蓝色荧光，熏氨蒸气后变为黄绿色荧光。呋喃香豆精应呈现蓝色或黄棕色的荧光。
9．树脂类 取检品的乙醇溶液1ml，加1－2％氢氧化钠溶液2-3ml，显浑浊或沉淀，在水浴上加3-5分钟，溶液变清或沉淀减少，加酸酸化则又浑浊或沉淀，示含有酸性树脂。如在上项反太中，当加碱加热后，溶液仍浑浊示含有中性树脂。
因酸性树脂能溶于碱液中，加热后就成澄明液。中性树脂则不溶于碱性溶液中，故溶液仍显浑浊。
10．生物碱 取检品的酸性乙醇溶液20ml，调节pH值至6-7，蒸发除去乙醇，残渣加5％盐酸溶液4-5ml溶解，滤过，滤液供下列检查：
（1）碘化铋钾试液1ml，加碘化铋钾试液1－2滴，生成黄色或橘红色沉淀。
AIK＋BiI3.KI→AIK.BiI3.KI↓
（生物碱）（碘化铋钾） （桔红色）
（2）碘化汞试验：取滤液1ml加碘化汞钾试液1－2滴，生成白色淡黄色沉淀物。
AIK＋KI.HgI2→AIK.KI.HgI2↓
若在过量的试剂中其沉淀又复溶解。
（3）碘一碘化钾试验：取滤液ml，加碘化一碘化钾试液1－2滴，出现棕色沉淀或混浊。
（4）硅钨酸试验：取滤液1m1，加硅钨酸试液1－2滴，生成灰白色或淡黄色沉淀。加热可使反应灵敏。
（5）生物碱呈色反应：
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生物碱名称 |
呈色反应 |
生物碱名称 |
呈色反应 |
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甲醛硫酸试液 |
钼酸铵一硫酸试液 |
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紫→深紫 紫堇→蓝 紫蓝→蓝 紫堇→蓝 深红→棕 红橙 |
紫→棕绿 紫堇→绿 绿→蓝 绿→蓝 紫堇→绿 红紫 |
紫堇→橙 橙 橙 茶 一 紫→褐 |
绿 一 一 一 黄 绿→红黄 |
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11．有机酸
（1）溴酚蓝试验：取检品的酸性乙醇溶液点于滤纸，干后，喷雾0.1％溴酚蓝乙醇溶液（70％乙醇），立即在蓝色背景中显黄色斑点。如不明显，可喷雾氨水，然后暴露在盐酸气体中，背景逐渐由蓝色变为黄色，而有机酸的斑点仍然为蓝色。
（2）酸碱度试验：取检品液（水提取液）以pH试纸检查，如试纸颜色指示pH在7以下，可能含有有机酸。
（3）纸层析检出试验：见纸层析操作方法。
①支持剂：新华滤纸（中速）
②展开剂：正丁醇：醋酸：水（4：1：5）。
③显色剂：0.15溴酚蓝乙醇溶液（70％乙醇）。
结果：呈现蓝色斑点。
12．挥发渍及油脂
（1）取检品的乙醚溶液，置蒸发皿中，待溶剂挥发生，残渣为油状物，并有香气或特异自气，加热，油状物减少或消失示含挥发油。如无香气，或加状物不减少，可能为油脂，可于残渣中加入少许无水硫酸钠颗粒，直火加热，如产生气泡，并有剌激性特臭的浓白色气体（丙烯醛），示含油脂类化合物。
（2）取检品的乙醚溶液，点在滤纸上，待溶剂挥发生，喷雾0.05%荧光素钠溶液，再将滤纸下置碘蒸气上，熏几分钟，产生黄或黄绿色斑点，背景为粉红色示含挥发油。
（3）取检品的乙醇溶液，置白瓷皿中，待溶剂挥发生，残渣中加1％香草醛盐酸液，显黄色、红、棕、蓝、紫等颜色，示含挥发油。
（4）挥发油薄层微量检出反应：
①吸附剂：硅胶G（湿法制板）；中性氧化铝：石膏：水（5：1：7）。
②展开剂：正已烷：乙酸乙酯（85：15）；石油醚：乙酸乙酯（85：15）。
③显色剂：含5％香草醛的浓硫酸液（临用新配）1050烘2-10分钟；荧光照射；浓硫酸。
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