临床生物化学/核酸限制性片段长度多态性（RFLP）分析
| 医学电子书 >> 《临床生物化学》 >> 诊断分子生物学基本技术 >> 分子生物学实验诊断技术 >> 核酸限制性片段长度多态性（RFLP）分析 |
| 临床生物化学 |
|
|
|
RFLP分析是限制性内切酶、核酸电泳、印迹（blot）技术、探针-杂交技术的综合应用，多用于临床遗传性疾病的基因诊断。基本原理是遗传性疾病多有基因的缺陷，如基因缺失、基因插入、编码区小范围核苷酸序列改变或点突变等。前二者可将纯化的正常人和病人DNA同时用限制性内切酶切成片段，经电泳分离、印迹、探针杂交等找到目的基因。由于患者基因的缺失或插入，造成被限制性内切酶切开的片段（分子量）大小与正常人发生差异（限制性片段长度多态），使其电泳迁移率发生差异，而达到基因诊断的目的。小区域或点突变，可选用一个限制性内切酶的切点正好在这一变异位置，使切割作用和正常人发生差异（如正常人基因可切断而患者不能，或反之），达到诊断目的。现在PCR产物经变性为DNA单链，用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，只要有一个核苷酸发生变异，其电泳迁移率就会改变，进行多态分析（PCR-SSCP）。实际上把基因的异常位置设计在PCR扩增区域内，就能进行多态分析。（图18-8）
核酸纯化→内切酶作用→电泳分离→Southern blot→探针-杂交→显影，显色
图18-8 点突变Eco R1RFL
 核酸扩增技术 | 核酸一级结构（核苷酸序列sequence）分析  |
出自A+医学百科 “临床生物化学/核酸限制性片段长度多态性（RFLP）分析”条目 http://www.a-hospital.com/w/%E4%B8%B4%E5%BA%8A%E7%94%9F%E7%89%A9%E5%8C%96%E5%AD%A6/%E6%A0%B8%E9%85%B8%E9%99%90%E5%88%B6%E6%80%A7%E7%89%87%E6%AE%B5%E9%95%BF%E5%BA%A6%E5%A4%9A%E6%80%81%E6%80%A7%EF%BC%88RFLP%EF%BC%89%E5%88%86%E6%9E%90 转载请保留此链接
| 关于“临床生物化学/核酸限制性片段长度多态性（RFLP）分析”的留言： |  订阅讨论RSS
|
|
目前暂无留言 | |
| 添加留言 | |