临床生物化学/核酸限制性片段长度多态性(RFLP)分析
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RFLP分析是限制性内切酶、核酸电泳、印迹(blot)技术、探针-杂交技术的综合应用,多用于临床遗传性疾病的基因诊断。基本原理是遗传性疾病多有基因的缺陷,如基因缺失、基因插入、编码区小范围核苷酸序列改变或点突变等。前二者可将纯化的正常人和病人DNA同时用限制性内切酶切成片段,经电泳分离、印迹、探针杂交等找到目的基因。由于患者基因的缺失或插入,造成被限制性内切酶切开的片段(分子量)大小与正常人发生差异(限制性片段长度多态),使其电泳迁移率发生差异,而达到基因诊断的目的。小区域或点突变,可选用一个限制性内切酶的切点正好在这一变异位置,使切割作用和正常人发生差异(如正常人基因可切断而患者不能,或反之),达到诊断目的。现在PCR产物经变性为DNA单链,用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,只要有一个核苷酸发生变异,其电泳迁移率就会改变,进行多态分析(PCR-SSCP)。实际上把基因的异常位置设计在PCR扩增区域内,就能进行多态分析。(图18-8)
核酸纯化→内切酶作用→电泳分离→Southern blot→探针-杂交→显影,显色
图18-8 点突变Eco R1RFL
核酸扩增技术 | 核酸一级结构(核苷酸序列sequence)分析 |
出自A+医学百科 “临床生物化学/核酸限制性片段长度多态性(RFLP)分析”条目 http://www.a-hospital.com/w/%E4%B8%B4%E5%BA%8A%E7%94%9F%E7%89%A9%E5%8C%96%E5%AD%A6/%E6%A0%B8%E9%85%B8%E9%99%90%E5%88%B6%E6%80%A7%E7%89%87%E6%AE%B5%E9%95%BF%E5%BA%A6%E5%A4%9A%E6%80%81%E6%80%A7%EF%BC%88RFLP%EF%BC%89%E5%88%86%E6%9E%90 转载请保留此链接
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