生物化学与分子生物学/乳糖操纵元的表达调控

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如上所述[[乳糖]]操纵元的结构及其[[基因表达]]调控可综合于图19-7。

{{图片|grar96dc.jpg|乳糖操纵元的结构及调控示意图}}

图19-7　乳糖操纵元的结构及调控示意图

=== (一)[[阻遏蛋白]]的负性调控===

当[[大肠杆菌]]在没有乳糖的环境中生存时，1ac操纵元处于[[阻遏]]状态。i[[基因]]在其自身的[[启动子]]Pi控制下，低水平、组成性表达产生阻遏蛋白R，每个[[细胞]]中仅维持约10个分子的阻遏蛋白。R以四聚体形式与[[操纵子]]o结合，阻碍了[[RNA]][[聚合酶]]与启动子P1ac的结合，阻止了基因的[[转录]]起动。R的阻遏作用不是绝对的，R与o偶尔[[解离]]，使细胞中还有极低水平的β－[[半乳糖苷酶]]及透过酶的生成。

当有乳糖存在时，乳糖受β－半乳糖苷酶的[[催化]]转变为别乳糖，与R结合，使R[[构象]]变化，R四聚体解聚成单体，失去与o的亲和力，与o解离，基因转录开放，β－半乳糖苷酶在细胞内的含量可增加1000倍。这就是乳糖对1ac操纵元的诱导作用。

一些化学合成的乳糖类似物，不受β－半乳糖苷酶的催化分解，却也能与R特异性结合，使R构象变化，诱导1ac操纵元的开放。例如[[异丙基]]硫代[[半乳糖苷]](isopropylthiogalactoside,IPTG)就是很强的诱导剂，不被细胞[[代谢]]而十分稳定。X－gal(5-溴－4-氯－3-[[吲哚]]－β－半乳糖苷)也是一种人工化学合成的半乳糖苷，可被β－半乳糖苷酶水解产生兰色[[化合物]]，因此可以用作β－半乳糖苷酶活性的指示剂。IPTG和Xgal都被广泛应用在[[分子]][[生物学]]和[[基因工程]]的工作中。

{{图片|grar8uqo.jpg|乳糖，IPTG和Xgal的结构}}

图19-8　乳糖，IPTG和Xgal的结构

=== (二)[[CAP]]的正性调控===

[[细菌]]中的cAMP含量与[[葡萄糖]]的[[分解代谢]]有关，当细菌利用葡萄糖分解供给能量时，cAMP生成少而分解多，cAMP含量低；相反，当环境中无葡萄糖可供利用时，cAMP含量就升高。细菌中有一种能与cAMP特异结合的cAMP[[受体蛋白]]CRP(cAMp receptor protein)，当CRP未与cAMP结合时它是没有活性的，当cAMP浓度升高时，CRP与cAMP结合并发生空间构象的变化而[[活化]]，称为CAP(CRPcAMp activated protein)，能以[[二聚体]]的方式与特定的[[DNA]]序列结合。

在1ac操纵元的启动子P1ac上游端有一段与Plac部分重叠的序列，能与CAP特异结合，称为CAP结合[[位点]](CApbinding site)。CAP与这段序列结合时，可增强RNA聚合酶的转录活性，使转录提高50倍。相反，当有葡萄糖可供分解利用时，cAMP浓度降低，CRP不能被活化，1ac操纵元的[[结构基因]]表达下降。

{{图片|grar91ta.jpg|葡萄糖利用对乳糖操纵元的影响}}

图19-9　葡萄糖利用对乳糖操纵元的影响

由于P1ac是弱启动子，单纯因乳糖的存在发生去阻遏使1ac操纵元转录开放，还不能使细胞很好利用乳糖，必须同时有CAP来加强转录活性，细菌才能合成足够的酶来利用乳糖。1ac操纵元的强诱导既需要有乳糖的存在，又需要没有葡萄糖可供利用。通过这种机制，细菌优先利用环境中的葡萄糖，只有无葡萄糖而又有乳糖时，细菌才去充分利用乳糖。

细菌对葡萄糖以外的其他糖(如[[阿拉伯糖]]、[[半乳糖]]、[[麦芽糖]]等)的利用上也有类似对乳糖利的情况，在含有编码利用阿拉伯糖的[[酶类]]基因群的阿拉伯糖操纵元(araoperon)、半乳糖操纵元(gal operon)中也有CAP结合位点，CAP也起类似的正性调控作用。所以CAP的[[通用名]]称是分解代谢基因激活蛋白(catabolic gene activator protein)。

不难看出：CAP结合位点就是一种起正性调控作用的操纵子，CAP则是对转录起正性作用的控[[蛋白]]棗激活蛋白，编码CRP的基因也是一个调控基因，不过它并不在1ac操纵元的附近，CAP可以对几个操纵元都起作用。

从上所述，乳糖操纵元属于可诱导操纵元(inducible operon)，这类操纵元通常是关闭的，当受[[效应物]]作用后诱导开放转录。这类操纵元使细菌能适应环境的变化，最有效地利用环境能提供的能源[[底物]]。
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