酪氨酸酶

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[[酪氨酸酶]]是黑素合成的关键酶，可能是[[白癜风]][[自身免疫]]的重要[[抗原]]。最近发现部分白癜风患者[[血清]]中有酪氨酸酶[[抗体]]，且与白癜风[[临床类型]]和分期密切相关。提示自身免疫性白癜风发病机制与酪氨酸酶抗体水平有关，为其[[免疫治疗]]提供依据。酪氨酸酶抗体可以作为白癜风活动性的一个指标。

酪氨酸酶（TYR）是一种75kD含铜酶，来源于[[胚胎]][[神经]]峭[[细胞]]，是黑素[[代谢]]和[[儿茶酚胺]]的关键酶。Spritz等[1]证实人TYR是一种铜[[结合蛋白]]，有铜A和铜B[[位点]]。离子铜特异性能与人TYR结合，一个位点的铜结合可以促进另一个位点的铜结合。[[组氨酸]]在铜B位点协调其结合。TYR的[[多肽]]链的适当折叠对铜结合及其[[催化]]活性是关键性的，TYR[[突变]]可中断铜结合使其催化活性丧失。眼、[[皮肤]][[白化病]]是由于TYR[[基因突变]]所致，该病TYR阳性患者色素性皮肤损害发生率高[2]。[[超氧化物]]负离子（O2-）能穿透[[黑素细胞]]（MC）[[入胞]]内，TYR通过利用O2-保护MC，免受O2-[[细胞毒]]作用[3,4]。在[[黑素瘤]]患者黑素瘤细胞（MMC）和MC中抗氧化系统失衡，内源性反应性氧生成，细胞内不能抵御内源性超氧化物的攻击[5]。白癜风患者血清中TYR抗体的生成，提示白癜风的发病与自身免疫有关。　　
==酪氨酸酶的[[抗原性]]==
酶是多种自身免疫紊乱性[[疾病]]的[[自身抗原]][6]，TYR作为抗原必需具备下列条件：①酶活跃性；②[[免疫原性]]；③能诱导识别自身的抗体。

TYR能暴露于[[免疫系统]]中，从恶性或正常[[色素细胞]]来源的TYR，可以作为[[自身抗体]]产物的靶抗原；TYR与[[蛋白酶]]等无[[交叉反应]]，提示抗TYR抗体对TYR是特异性的，MC能表达MHCⅡ[[类分子]]，可作为抗原递呈细胞。人MMC能分泌TYR，TYR抗体在黑素瘤患者血清中发现，其它[[恶性肿瘤]]患者血清中则没有，提示[[恶性黑素瘤]]可产生抗TYR的抗体[7,8]，TYR[[基因]]编码抗原能被黑素瘤[[细胞毒性]]T细胞（CTL）识别[9]，显示系统免疫系统能对TYR发挥作用[10]。

哺乳动物[[黑素生成]]由多个[[基因位点]]共同参与调控。不同位点基因及相关[[蛋白]]具有多种特征性结构位点（B位点，C位点，S位点和P位点）。哺乳动物色素细胞[[调节基因]]有多种，这些基因的最大特点是定位于C位点（C-allbino locus），编码TYR。鼠C位点基因长70kb，定位第7号[[染色体]]，人C位点基因长50kb，定位11号染色体。鼠及人C位点基因均含有5个[[外显子]]和4个[[内含子]]。TYR是一种膜[[糖蛋白]]，可在MC中特异性表达。B位点（brown locus）基因编码TRP-1（gp75）。鼠B位点基因长18kb，有8个外显子和7个内含子，定位14号染色体。人B位点[[基因定位]]第9号染色体。TRP-1能在MC中表达且定位[[黑素体]]膜，具[[酪氨酸羟化酶]]和[[多巴]][[氧化酶]]活性。S位点（slaty locus）基因编码TRP-2，小鼠S位点基因位于第14号染色体，为多巴色素[[异构酶]]。鼠及人P位点（Pmel-17 locus）基因编码stablin蛋白，人及鼠P位点基因定位第10、12号染色体，参与黑素合成终末途径的调节。

TYR、gp75、TRP-2结构相似，其[[基因产物]]有下列特点：①高[[同源性]]（[[氨基酸]]序列相同40％，相似45％）。②分子量几乎相同。③[[三级结构]]有高度[[保守序列]][[半胱氨酸]][[残基]]。④具有[[酶活性]]铜结合位点。⑤含有跨膜区。

TYR是黑素合成的关键酶，其已知的氨基酸序列含有一段前导[[信号肽]]和一个跨膜结构基元（motif），与黑素体膜上的锚定蛋白（anchorin）相一致。HLA-A2递呈TYR抗原，不同的细胞毒性T[[淋巴细胞]]克隆识别具有活性基元的九[[肽]]LLAVLYCLL，说明TYR在不同个体的表达呈相当高的同源性。TYR的表达均一性优于TRP-2，表达频率亦较TRP-1高。除CD8+T细胞外，人CD4+T细胞也能特异性识别TYR基因编码的相关抗原。黑素瘤患者中检出TYR，TYR是MMC上的[[分化抗原]]。可作为主动[[免疫]]的良好抗原靶。TYR既受MHC-Ⅰ限制，又受MHC-Ⅱ限制的黑素瘤[[共同抗原]]，诱生的CD8+T细胞和CD4+T细胞均能产生有效的抗肿瘤应答。TRP-1[[原位杂交]]证实编码基因位于人第9号染色体q23区，为IgG抗体识别抗原，具有DHI-2[[羧酸]]氧化酶活性，非突变型TRP-1抗原可被HLA-A31特异性CTL识别。外源性TRP-1cDNA在MMC等中表达。gp100即MC/MMC特异性蛋白Pmel-17，免疫电镜证实gp100主要位于Ⅰ、Ⅱ期黑素体膜，广泛表达于人MMC（50％）。HLA-A2 mMC的gp100可被自体[[肿瘤浸润性淋巴细胞]]（TIL）识别。识别部位是十肽LLDGTATLRL（aa457-486），从gp100提取的十肽能体外诱导TIL，将TIL细胞与IL-2[[配伍]]应用于HLA-A2+黑素瘤患者，可消除自发性黑素瘤的转移灶。　　
==酪氨酸酶抗体==

===（一）检测方法：===
TYR抗体在白癜风患者血清中检出。Song等[11]1994年用[[细菌]]合成人TYR，[[免疫印迹法]]检测TYR抗体。这种方法相对不敏感且不能定量检测。Baharav等[12]1996年使用[[蘑菇]]TYR，ELISA法检测TYR抗体，此法敏感，但所用蘑菇TYR与人TYR同源性低。而Xie等[13]1996年则用人MC提取物作为TYR的来源，[[免疫沉淀法]]等检测TYR抗体。Kemp等[14]1997年采用放免法（RIA）检测TYR抗体。近来此法已被用来检测[[自身免疫性疾病]]患者血清中的[[特异性抗体]][15-17]。这种方法能敏感定量检测抗体。　　
===（二）产生、特点、特性：===
1.抗TYR抗体的产生：用人TYR cDNA[[转染]]L细胞，获得L-TY细胞，免疫同源性C3H鼠，即用5×106L-TY细胞与等量Frend[[佐剂]]混合，[[腹膜]]内注入有6周鼠龄的雌性C3H鼠体内，每次间隔2周，第3，4次用5×106细胞裂解物与等量Frend佐剂混合免疫动物。第4次注射后3天，抽血，分离血清，同时用未转染L细胞去除非特异反应性成分，结果用人TYR cDNA转染L[[细胞免疫]]的8只C3H鼠中，4次免疫后，有4只对TYR cDNA转染L细胞的鼠[[血清抗体]][[滴度]]＞10-4，C3H鼠免疫前及正常鼠对L-TY细胞无反应性。用L-TY细胞免疫动物获得的血清能沉淀L-TY和有色素MMC细胞裂解物。免疫沉淀法可见分子量为70kD～80kD的宽幅条带，可能为TYR[[生物合成]][[中间代谢]]产物，未转染L细胞，TYR阴性无色素MMC中未见特异性条带。

2.免疫印迹法检测TYR抗体：用抗TYR血清10-3稀释度，在TYR转染L细胞和有色素MMC可见细胞内颗粒[[染色]]，[[亲代]]L细胞内无胞内染色，在L-TY细胞，细胞内染色颗粒位于核周和[[胞质]]内。无色素MMC，不表达TYR mRNA，无TYR活性，与TYR抗体无相互作用。有色素MMC和培养MC，高度表达TYR活性，黑素形成多，[[细胞质]]颗粒深度染色。

[[单克隆抗体]]TA99能识别TRP-1糖蛋白，TA99能与人有色素MMC表达的TRP-1和转染L-GP细（用编码TRP-1全长cDNA转染鼠L细胞获得）表达的全长人TRP-1cDNA相互作用，且免疫耗竭实验证实TA99不耗竭能产生分子量为70kD～80kD条带的抗TYR血清，[[免疫荧光]]分析抗TYR抗体与TRP-1，TYR l-GP细胞无相互作用，抗TYR抗体不沉淀来自L-GP细胞的TRP-1。

3.TYR抗体使TYR活性丧失：免疫鼠血清能沉淀鼠MMC，L-TY细胞裂解物，提示免疫鼠血清能灭活有色素MMC及L-TY细胞TYR的活性，加入L-多巴[[底物]]后，见黑素形成，提示TYR活性恢复，免疫沉淀时如用免疫前血清则无黑素形成[7]。　　
==白癜风==

===简介===
白癜风与TYR抗体：TYR抗体在白癜风中常常发生。Song等[11]应用免疫[[印迹法]]检测了26例白癜风患者血清，其中有16例（61％）可与[[重组]]TYR特异性结合。26例白癜风患者，有16例（61％）血清TYR抗体阳性，其中7例伴发非胰岛素性[[糖尿病]]（IDDM）有4例（57％）、8例伴发[[桥本甲状腺炎]]有4例（50％）、3例伴发Grave病有3例（100％）、7例伴发Addison病有4例（57％）阳性。Kemp等[14]应用35S标记人TYR，放免法（RIA）检测白癜风患者血清TYR抗体。在被检测的46例白癜风患者的血清中，5例（10.9％）TYR抗体阳性，20例对照血清及10例桥本甲状腺炎患者血清阴性。Baharav等应用固相ELISA法检测18例白癜风患者（弥漫性7例，局限性1例）血清中的TYR igG[[抗体滴度]]，结果（OD均值）弥漫性白癜风为0.658±0.251，局限性白癜风0.188±0.05，健康对照组0.093±0.049，显示弥漫性白癜风TYR igG抗体滴度较局限性白癜风及健康对照组显著增高。这些TYR抗体与TYR的亲和力高，与b位点基因产物TRP-1没有交叉反应[12]。

大多数急性白癜风及黑素瘤患者有对MC、MMC的抗体，这些抗体在体外通过[[补体]]介导细胞毒作用和抗体依赖细胞毒作用杀伤MC。Cui等检测发现30例黑素瘤患者血清有24例（80％）、29例白癜风患者血清有24例（83％）抗体阳性，而28例对照组只有2例（7％）阳性。人及动物黑素瘤中，白癜风的出现能改变其进程。用MMC免疫动物可诱发白癜风。重组抗MMC抗体对黑素瘤有效[18]。黑素瘤伴发白癜风时预后较好，白癜风患者抗体出现的频率和水平与黑素瘤退变（regression）一致。提示抗白癜风和黑素瘤抗体作用于色素细胞（MC，MMC）上有相同的抗原，并且这些抗原能在MC和MMC上表达[19]。白癜风MC抗体既能溶解MC，致皮肤[[白斑]]形成，又能有效破坏MMC；MMC抗体也能与正常MC结合，诱导黑素瘤产生白癜风样白斑，TYR抗体则是二者之间的桥梁。

白癜风患者血清MC抗体滴度与该病活动性和严重程度密切相关，50％局限性白癜风患者血清中有对MC的抗体，而弥漫性白癜风则高达93％，且弥漫性白癜风MC抗体能与MMC结合，抑制其[[增殖]]。在补体存在的情况下溶解细胞，减少体内鼠黑素瘤转移，MMC上抗体[[表位]]滴度在白癜风较健康者及黑素瘤高。黑素体是黑素合成和贮存的亚细胞器，Ando等[20]认为黑素体数量变化与TYR mRNA水平有关。UVB上调TYR mRNA水平致[[皮肤色素沉着]][21]。TYR和gp75都是黑素体转膜糖蛋白，TYR抗体与gp75没有交叉反应[22]。

白癜风患者血清含有抗MC抗体，MC抗体在Smyth鸡模型中于脱色前数周被检测到。近来黑素瘤患者血清中亦分离到TRP-1自身抗体，循环中的这些抗体被认为是导致Smyth鸡[[色素脱失]]斑的主要原因[23,24]。白癜风患者血清中TYR抗体的检出，进一步提示白癜风的[[分子]]发病机制，为[[临床分型]]、分期、治疗及预后提供依据。　　
===其他===
一种皮肤及其附属物色素缺乏的[[遗传病]]。可分全身性白化病和局部性白化病两种，以前者最为常见。患者皮肤呈白色，[[毛发]]银白或淡黄色；[[虹膜]]呈淡红色或淡灰色，半透明，[[瞳孔]]淡红，[[视网膜]]无色素、羞光，[[眼球震颤]]，[[视力]]下降；病人对阳光很敏感，日晒后，皮肤可增厚并发生[[鳞状上皮]][[癌]]。白化病的发病是由于[[黑色素]][[代谢障碍]]所致。正常人体内的黑色素由[[黑色素细胞]]合成，黑色素细胞内有黑[[素小体]]，它含有酪氨酸酶，这种酶能将[[酪氨酸]]转变成黑色素。白化病患者体内黑色素细胞数目正常，细胞内也有黑素小体，但由于控制酪氨酸酶的基因发生突变，不能合成酪氨酸酶，于是黑素小体中酪氨酸酶缺乏，不能使酪氨酸转变成黑色素，从而导致皮肤、粘膜、毛发、眼等白化。白化病有多种遗传方式。全身性白化病属[[常染色体隐性]]遗传方式。局部白化病为[[常染色体]][[显性]]遗传，[[眼白化病]]（皮肤、毛发均正常）可为X伴性隐性或常染色体隐性遗传。白化病遍及全世界，总[[发病率]]为1/10000～1/20000。对白化病目前尚无有效的治疗方法，因此应以预防为主。禁止[[近亲结婚]]是重要的预防措施之一。对此病也可作[[产前诊断]]。在[[妊娠]]4～5个月时，通过[[胎儿]]镜取胎儿一小块皮肤，在电子显微境下检查胎儿是否为白化病，以避免患儿的出生，达到优生的目的。在遗传的方式上白化病是属于常染色体上的隐性遗传。只有当个体为隐性[[纯合子]](aa)时,才表现为白化病,通常白化病患者的父母为[[表型]]正常的[[杂合子]],其因型为(Aa)是致病基因的[[携带者]],患者同胞中也有1/4的发病风险。　　
==五如何区分白化病与白癜风?==
白化病与白癜风均属于色素障碍性[[皮肤病]]。二者都是以皮肤出现白斑为主要[[临床表现]]，无明显痒痛感觉。但白化病与白癜风是截然不同的两种疾病。临床多从如下几方面来区分：　　
===(1)发病年龄===
白化病自出生时就有明显的“变白”表现；而白癜风为后天发生，可开始于任何年龄，但以20岁以前发病人数最多。　　
===(2)家族史===
白化病有典型的家族遗传史；白癜风的发病与遗传有一定关系，但无大量的统计资料来证实，我国学者报告白癜风与遗传有关联者仅占3.9%～10.7%。　　
===(3)好发部位===
泛发性白化病是全身的皮肤、毛发及眼睛均变白；白癜风可发生在任何部位，但好发于暴露及皱褶部位。　　
===(4)白斑特点===
白化病的皮肤全部变白，毛发呈白色或淡黄色，眼睛缺乏色素，[[畏光]]，白天视物不清；白癜风的白斑仅限于局部，边缘清楚，周边色素稍深，白斑中有的散在岛屿状色素区，白斑大小、形态不一，[[物理]]刺激可诱发新的白斑或使原有白斑扩大。白斑上的毛发可以变白或者不白。　　
===(5)[[病理]]检查===
取患者皮肤组织制成切片，在[[显微镜]]下观察：白化病患者表皮黑色素完全消失；而白癜风患者白斑区黑色素减少或完全消失，而边缘则黑色素相对增加。　　
===(6)治疗===
白化病药物治疗无效，仅能通过物理方法遮光以减轻患者不适[[症状]]；白癜风通过使用光敏性药物、[[激素]]及[[中药]]等治疗后白斑会减弱甚至消失。 

白化病人应该注意些什么? 

白化病是一种遗传性皮肤病，治疗上没有确切有效的方法。白化病人应注意以下几方面：①避免强烈的日光照射；②注意保护眼睛；③避免近亲结婚。

[[分类:生物化学]][[分类:生物]][[分类:化学]][[分类:蛋白质]]